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透明胶水:一种补料发酵生产L-丙氨酸的方法

作者:专利检索网
来源:https://www.cange.org.cn/famingzhuanli
日期:2020-08-28 17:48



发明专利
授权公告号
授权公告日
申请号 201710295723.2
申请日 2017.04.28
同一申请的已公布的文献号 CN 107022583 A
2017.08.08
专利权人 淮北新旗氨基酸有限公司地址 235047 安徽省淮北市经济开发区龙湖工业园
发明人 黄建坡 刘焕书 张培红 苗位云 徐龙 孟成 郭治远 
专利代理机构 北京路浩知识产权代理有限公司 11002代理人 王文君
Int.Cl.C12P 13/06
(2006.01)C12N 1/20
(2006.01)C12R 1/225
(2006.01)
对比文件CN 103602609 A,2014.02.26,CN 101671706 A,2010.03.17,CN 106222309 A,2016.12.14,审查员 袁一方
发明名称一种补料发酵生产L-丙氨酸的方法
摘要本发明涉及一种补料发酵生产L-丙氨酸的方法,其为在利用葡萄糖浓度为95-105g/L的葡萄糖培养基对德氏乳杆菌突变菌株Lds.0108进行培养的过程中,当发酵液中残糖含量低于45g/L时,向发酵液中一次性补加浓度为50-75%的葡萄糖溶液,至发酵液中添加的葡萄糖的总浓度为125~170g/L,继续培养至发酵结束。
本发明所述的方法,通过在基础发酵培养基基础上补加葡萄糖溶液来提高L-丙氨酸产量,简单易行,效果显著,发酵罐中L-丙氨酸浓度由原来的80-100g/L,提高到110-120g/L,发酵转化率达到90%以上。
权利要求书3页 说明书5页CN 107022583 B2020.06.19CN 107022583 B 1.一种补料发酵生产L-丙氨酸的方法,其特征在于,在利用葡萄糖初始浓度为95-105g/L的葡萄糖培养基对德氏乳杆菌突变菌株Lds.0108进行培养的过程中,当发酵液中残糖含量低于45g/L时,向发酵液中一次性补加浓度为50-75%的葡萄糖溶液,至发酵液中添加的葡萄糖的总浓度为125~170g/L,继续培养至发酵结束;所述德氏乳杆菌突变菌株Lds.0108保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏号为:CCTCC?NO:M2013361。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,当发酵液中残糖含量为30-41g/L时,向发酵液中补加葡萄糖溶液。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,当发酵液中残糖含量低于33~35g/L时,向发酵液中一次性补加浓度为68~72%的葡萄糖溶液,至发酵液中添加的葡萄糖的总浓度为160~168g/L。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,每升所述葡萄糖培养基中,包括:葡萄糖95-105?g,Na2HPO4·12H2O?20g,KH2PO4?2.0g,NaCl?0.5g,MgSO4·7H2O?0.2g,微量无机盐溶液10mL/L,余量为纯化水;所述微量无机盐溶液中:FeCl3·6H2O?2.5g/L,CoCl2·6H2O?0.2g/L,CuCl2·2H2O?0.1g/L,ZnCl2?0.2g/L,Na2MoO4·2H2O?0.3g/L,H3BO3?0.1g/L,MnCl2·4H2O?0.5g/L,纯化水余量。
5.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,每升所述葡萄糖培养基中,包括:葡萄糖95-105?g,Na2HPO4·12H2O?20g,KH2PO4?2.0g,NaCl?0.5g,MgSO4·7H2O?0.2g,微量无机盐溶液10mL/L,余量为纯化水;所述微量无机盐溶液中:FeCl3·6H2O?2.5g/L,CoCl2·6H2O?0.2g/L,CuCl2·2H2O?0.1g/L,ZnCl2?0.2g/L,Na2MoO4·2H2O?0.3g/L,H3BO3?0.1g/L,MnCl2·4H2O?0.5g/L,纯化水余量。
6.根据权利要求1或4或5所述的方法,其特征在于,利用葡萄糖培养基对德氏乳杆菌突变菌株Lds.0108进行培养的条件为:温度302℃;通风量0m3/h,压力0.04MPa-0.06MPa;pH6.50.1。
7.根据权利要求1或2或4或5所述的方法,其特征在于,包括如下步骤:1)制备德氏乳杆菌突变菌株Lds.0108种子液;2)向所述葡萄糖培养基中按种体积分数为5-10%的所述种子液按种到进行发酵培养;3)当发酵液中葡萄糖的浓度小于45g/L时,向所述发酵液中添加浓度为50-75%的葡萄糖浓度,至发酵液中添加的葡萄糖的总浓度为125~170g/L,继续培养至葡萄糖的浓度为≤2g/L,结束发酵。
8.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,包括如下步骤:1)制备德氏乳杆菌突变菌株Lds.0108种子液;2)向所述葡萄糖培养基中按种体积分数为5-10%的所述种子液按种到进行发酵培养;3)当发酵液中葡萄糖的浓度小于45g/L时,向所述发酵液中添加浓度为50-75%的葡萄糖浓度,至发酵液中添加的葡萄糖的总浓度为125~170g/L,继续培养至葡萄糖的浓度为≤2g/L,结束发酵。
权 利 要 求 书1/3页2CN 107022583 B2 9.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,包括如下步骤:1)制备德氏乳杆菌突变菌株Lds.0108种子液;2)向所述葡萄糖培养基中按种体积分数为5-10%的所述种子液按种到进行发酵培养;3)当发酵液中葡萄糖的浓度小于45g/L时,向所述发酵液中添加浓度为50-75%的葡萄糖浓度,至发酵液中添加的葡萄糖的总浓度为125~170g/L,继续培养至葡萄糖的浓度为≤2g/L,结束发酵。
10.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)制备OD值为3.5-7.0的德氏乳杆菌突变菌株Lds.0108种子液种子液;
(2)向葡萄糖培养基中按种体积分数为5-10%接种所述种子液,并进行发酵培养;所述葡萄糖培养基的配方为每升所述葡萄糖培养基中,包括葡萄糖95-105g,Na2HPO4·12H2O?20g,KH2PO4?2.0g,NaCl?0.5g,MgSO4·7H2O?0.2g,微量无机盐溶液10mL/L,余量为纯化水;所述微量无机盐溶液中:FeCl3·6H2O?2.5g/L,CoCl2·6H2O?0.2g/L,CuCl2·2H2O?0.1g/L,ZnCl2?0.2g/L,Na2MoO4·2H2O?0.3g/L,H3BO3?0.1g/L,MnCl2·4H2O?0.5g/L,纯化水余量;培养条件为:温度302℃;通风量0m3/h,压力0.04MPa-0.06MPa;pH:6.50.1;
(3)补料培养当发酵液中葡萄糖的浓度为30-41g/L时,向所述发酵液中添加浓度为50-75%的葡萄糖浓度,至发酵液中添加的葡萄糖的总浓度为125~170g/L,继续培养至培养液中的残糖浓度为≤2g/L,结束发酵。
11.根据权利要求8或9所述的方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)制备OD值为3.5-7.0的德氏乳杆菌突变菌株Lds.0108种子液种子液;
(2)向葡萄糖培养基中按种体积分数为5-10%接种所述种子液,并进行发酵培养;所述葡萄糖培养基的配方为每升所述葡萄糖培养基中,包括葡萄糖95-105g,Na2HPO4·12H2O?20g,KH2PO4?2.0g,NaCl?0.5g,MgSO4·7H2O?0.2g,微量无机盐溶液10mL/L,余量为纯化水;所述微量无机盐溶液中:FeCl3·6H2O?2.5g/L,CoCl2·6H2O?0.2g/L,CuCl2·2H2O?0.1g/L,ZnCl2?0.2g/L,Na2MoO4·2H2O?0.3g/L,H3BO3?0.1g/L,MnCl2·4H2O?0.5g/L,纯化水余量;培养条件为:温度302℃;通风量0m3/h,压力0.04MPa-0.06MPa;pH:6.50.1;
(3)补料培养当发酵液中葡萄糖的浓度为30-41g/L时,向所述发酵液中添加浓度为50-75%的葡萄糖浓度,至发酵液中添加的葡萄糖的总浓度为125~170g/L,继续培养至培养液中的残糖浓度为≤2g/L,结束发酵。
12.根据权利要求10所述的方法,其特征在于,所述步骤3)为当发酵液中残糖含量低于33~35g/L时,向发酵液中一次性补加浓度为68~72%的葡萄糖溶液,至发酵液中添加的葡萄糖的总浓度为160~168g/L。
13.根据权利要求11所述的方法,其特征在于,所述步骤3)为当发酵液中残糖含量低于权 利 要 求 书2/3页3CN 107022583 B3 33~35g/L时,向发酵液中一次性补加浓度为68~72%的葡萄糖溶液,至发酵液中添加的葡萄糖的总浓度为160~168g/L。
14.根据权利要求10或12或13所述的方法,其特征在于,所述德氏乳杆菌突变菌株Lds.0108种子液的制备包括如下步骤:
(1)在无菌条件下,用接种环挑取德氏乳杆菌突变菌株Lds.0108接种于固体LB固体培养基表面,置于28-30℃恒温条件下培养16-18h;
(2)在无菌条件下,用无菌生理盐水将斜面上的菌体洗下,得菌悬液;
(3)将所述菌悬液液接种于液体LB培养基中,在温度为30℃,空气流量为2L/min,罐压0.04-0.06MPa的条件下进行培养,至发酵液的OD值为3.5-7.0,即得。
15.根据权利要求11所述的方法,其特征在于,所述德氏乳杆菌突变菌株Lds.0108种子液的制备包括如下步骤:
(1)在无菌条件下,用接种环挑取德氏乳杆菌突变菌株Lds.0108接种于固体LB固体培养基表面,置于28-30℃恒温条件下培养16-18h;
(2)在无菌条件下,用无菌生理盐水将斜面上的菌体洗下,得菌悬液;
(3)将所述菌悬液液接种于液体LB培养基中,在温度为30℃,空气流量为2L/min,罐压0.04-0.06MPa的条件下进行培养,至发酵液的OD值为3.5-7.0,即得。
权 利 要 求 书3/3页4CN 107022583 B4 一种补料发酵生产L-丙氨酸的方法技术领域
[0001]本发明涉及微生物发酵技术领域,具体涉及一种补料发酵生产L-丙氨酸的方法。
背景技术
[0002]L-丙氨酸为无色至白色结晶性粉末,溶于水、乙醇,不溶于乙醚和丙酮。
L-丙氨酸是一种医药中间体,是生产维生素B6及L-氨基丙醇的主要原料。
在食品领域,L-丙氨酸具有独特的改善风味作用,可以明显提高食品和饮料中蛋白质的利用率,改善有机酸的酸味。

[0003]目前,工业上主要采用L-天冬氨酸-β-脱羧酶转化L-天冬氨酸生产L-丙氨酸,生产设备投入少,反应简单,但主要原料L-天冬氨酸价格波动太大,难以保证常年稳定生产。
另外,近期有公司采用厌氧直接发酵转化葡萄糖生产L-丙酸。
厌氧发酵法主要以葡萄糖为主要原料,价格低廉,但转化生成L-丙氨酸浓度低,转化率低,导致发酵法L-丙氨酸生产成本较高。
发明内容
[0004]本发明的目的是提供一种补料发酵生产L-丙氨酸的方法,其为,在利用葡萄糖初始浓度为95-105g/L的葡萄糖培养基对德氏乳杆菌突变菌株Lds.0108进行培养的过程中,当发酵液中残糖含量低于45g/L时,向发酵液中一次性补加浓度为50-75%的葡萄糖溶液,至发酵液中添加的葡萄糖的总浓度为125~170g/L,继续培养至发酵结束。

[0005]本发明所述的方法,一方面,不在最初配制培养基时添加所有的葡萄糖,不会因一次性添加高浓度的葡萄糖产生高渗透压而对菌体造成伤害。
另一方面,在培养的过程中添加葡萄糖,可进一步增加L-丙氨酸的产量。
德氏乳杆菌突变菌株Lds.0108在发酵的过程中,会产生代谢产物L-丙氨酸,它会给菌体造成一定的渗透压,继续补加葡萄糖也会增大菌体的渗透压,控制在培养基中的葡萄糖浓度小于45g/L时向培养基中添加浓度为50~75%的葡萄粮溶液,由于补加的葡萄溶液中的水的稀释作用,培养液中的L-丙氨酸和葡萄糖产生的渗透压不会给菌体生长带来不良的影响。
而且,上述浓度的葡萄糖在培养的过程中不会因浓度过大而产生色素类物质,不会影响有效物质的提取,不会对微生物的生长产生影响。

[0006]优选的,当发酵液中残糖含量为30-41g/L时,向发酵液中补加葡萄糖溶液。
当残糖浓度过高时,补加高浓度葡糖糖后糖浓度太高,形成高渗透压,对菌体伤害大;残糖过低,菌体衰老,酶系统活力小,影响补加葡萄糖后整体转化速度。

[0007]作为一种优选的补加方案,当发酵液中残糖含量低于33~35g/L时,向发酵液中一次性补加浓度为68~72%的葡萄糖溶液,至发酵液中添加的葡萄糖的总浓度为160~168g/L,继续培养至发酵结束。

[0008]优选的,每升所述葡萄糖培养基中,包括:葡萄糖95-105g,Na2HPO4·12H2O?20g,KH2PO4?2.0g,NaCl?0.5g,MgSO4·7H2O?0.2g,微量无机盐溶液10mL/L,余量为纯化水;
[0009]所述微量无机盐溶液中:FeCl3·6H2O?2.5g/L,CoCl2·6H2O?0.2g/L,CuCl2·2H2O?0.1g/L,ZnCl2?0.2g/L,Na2MoO4·2H2O?0.3g/L,H3BO30.1g/L,MnCl2·4H2O?0.5g/L,纯化水说 明 书1/5页5CN 107022583 B5 余量。

[0010]优选的,利用葡萄糖培养基对德氏乳杆菌突变菌株Lds.0108进行培养的条件为:温度30±2℃;通风量0m3/h,压力0.04MPa-0.06MPa;pH:6.5±0.1。

[0011]优选的,本发明所述的方法,通过液氨来调节发酵液中的pH。
使用氨同时提供氨基给葡糖糖分解产物,合成L-丙氨酸。

[0012]优选的,本发明所述的方法,包括如下步骤:
[0013]1)制备OD值为3.5-7.0的德氏乳杆菌突变菌株LDS.0108种子液;
[0014]2)向所述葡萄糖培养基中按种体积分数为5-10%的所述种子液按种到进行发酵培养;
[0015]3)当发酵液中葡萄糖的浓度小于45g/L时,向所述发酵液中添加浓度为50-75%的葡萄糖浓度,至发酵液中葡萄糖的浓度高于所述葡萄糖培养基中葡萄糖的浓度,继续培养至发酵结束。

[0016]优选的,所述德氏乳杆菌突变菌株LDS.0108种子液的OD值为3.5-7.0。

[0017]优选的,所述德氏乳杆菌突变菌株LDS.0108种子液的制备包括如下步骤:
[0018]
在无菌条件下,用接种环挑取德氏乳杆菌突变菌株菌种接种于固体LB培养基茄形瓶斜面,放置于28-30℃恒温培养箱中,培养16-18h;
[0019]
在无菌条件下,用无菌生理盐水将斜面上的菌体洗下,得菌悬液;
[0020]
将所述菌悬液液接种于液体LB培养基中,在温度为30℃,空气流量为2L/min,罐压0.04-0.06MPa的条件下进行培养,至发酵液的OD值为3.5-7.0。

[0021]在进行大规模发酵的过程中,在上述方法的基础上需进行二次发酵,即重复步骤
两次,得到OD值5-7.0的种子液。

[0022]本发明使用的德氏乳杆菌突变菌株Lds.0108保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏号为:CCTCC?NO:M2013361。

[0023]进一步优选的,本发明所述的方法包括如下步骤:
[0024]1)制备OD值为3.5-7.0的种子液;
[0025]2)向葡萄糖培养基中按种体积分数为5-10%按种所述种子液,并进行发酵培养;
[0026]所述葡萄糖培养基的配方为,每升所述培养基中,含有葡萄糖95-105g,Na2HPO4·12H2O?20g,KH2PO4?2.0g,NaCl?0.5g,MgSO4·7H2O0.2g,微量无机盐溶液10mL/L,余量为纯化水;
[0027]所述微量无机盐溶液中:FeCl3·6H2O?2.5g/L,CoCl2·6H2O?0.2g/L,CuCl2·2H2O?0.1g/L,ZnCl2?0.2g/L,Na2MoO4·2H2O?0.3g/L,H3BO30.1g/L,MnCl2·4H2O?0.5g/L,纯化水余量;
[0028]培养条件为:温度30±2℃;通风量0m3/h,压力0.04MPa-0.06MPa;pH:6.5±0.1;
[0029]3)补料培养
[0030]当发酵液中葡萄糖的浓度为30-41g/L时,向所述发酵液中添加浓度为50-75%的葡萄糖浓度,至发酵液中添加的葡萄糖的总浓度为125~170g/L,继续培养至培养液中的残糖浓度为≤2g/L结束发酵。

[0031]最优选的,本发明所述的方法包括如下步骤:
[0032]1)制备OD值为3.5-7.0的种子液;说 明 书2/5页6CN 107022583 B6
[0033]2)向葡萄糖培养基中按种体积分数为5-10%按种所述种子液,并进行发酵培养;
[0034]所述葡萄糖培养基的配方为葡萄糖95-105g,Na2HPO4·12H2O20g,KH2PO4?2.0g,NaCl?0.5g,MgSO4·7H2O?0.2g,微量无机盐溶液10mL/L,余量为纯化水;
[0035]所述微量无机盐溶液中:FeCl3·6H2O?2.5g/L,CoCl2·6H2O?0.2g/L,CuCl2·2H2O?0.1g/L,ZnCl2?0.2g/L,Na2MoO4·2H2O?0.3g/L,H3BO30.1g/L,MnCl2·4H2O?0.5g/L,纯化水余量;
[0036]培养条件为:温度30±2℃;通风量0m3/h,压力0.04MPa-0.06MPa;pH:6.5±0.1;
[0037]3)补料培养
[0038]当发酵液中残糖含量低于33~35g/L时,向发酵液中一次性补加浓度为68~72%的葡萄糖溶液,至发酵液中添加的葡萄糖的总浓度为160~168g/L。

[0039]本发明所述的方法具有如下有益效果:
[0040]本发明使用德氏乳杆菌突变菌株LDS.0108为出发菌株,通过在基础发酵培养基基础上补加葡萄糖溶液来提高L-丙氨酸产量,方法简单易行,发酵罐中L-丙氨酸浓度由原来的80-100g/L,提高到110-123g/L,发酵转化率达到90%以上,发酵残糖浓度保持不变,虽然发酵周期虽有所增加,但单位产品成本有大幅降低。
具体实施方式
[0041]以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。

[0042]实施例中所涉及的葡萄糖培养基由以下方法制备得到:
[0043]按以下成分含量配制发酵培养基:葡萄糖100g/L,Na2HPO4·12H2O?20g/L,KH2PO4?2.0g/L,NaCl?0.5g/L,MgSO4·7H2O0.2g/L,微量无机盐10ml/L,余量为纯化水;
[0044]其中微量无机盐包括:FeCl3·6H2O?2.5g/L,CoCl2·6H2O?0.2g/L,CuCl2·2H2O?0.1g/L,ZnCl2?0.2g/L,Na2MoO4·2H2O?0.3g/L,H3BO30.1g/L,MnCl2·4H2O?0.5g/L,余量为纯化水。

[0045]将上述培养基在121℃灭菌,保压30min,降温到30℃,备用;
[0046]以下实施例中葡萄糖溶液的制备方法为:按需要体积配制50-75%的葡萄糖溶液,定容后,115℃灭菌,保压20min,冷却备用。

[0047]下述实施例中,实施例1~4均在10L的发酵罐中进行,实施例5在10T的发酵罐中进行,因此在制备种子液的过程中制备二级种子液,其OD值远远高于实施例1~4。

[0048]实施例1
[0049]本实施例涉及一种L-丙氨酸的制备方法,具体包括如下步骤:
[0050]1、制备德氏乳杆菌突变菌株Lds.0108种子液
[0051]1)在无菌条件下,用接种环挑取德氏乳杆菌突变菌株菌种接种于固体LB培养基茄形瓶斜面,放置于28-30℃恒温培养箱中,培养17h。

[0052]2)在无菌条件下,用消毒后的100ml生理盐水洗脱菌体,得菌悬液。

[0053]3)将菌悬液接种于液体LB培养基中,在温度为30℃;空气流量为2L/min,罐压0.04-0.06MPa;培养5.5h至OD
(600nm):4.05,得种子液。

[0054]2、将所述种子液按体积分数7%接种到上述葡萄糖培养基中,在温度为为30℃;空气流量为2m3/h的条件下发酵培养,培养过程中,通过流加空气保持罐压0.04-0.06MPa;采说 明 书3/5页7CN 107022583 B7 用液氨控制pH为6.5。

[0055]3、当发酵液残葡萄糖浓度为32.8g/L,一次性补加50%葡萄糖溶液至发酵液中的总的葡萄糖的添加浓度为158.4g/L,继续至发酵液中的葡萄糖浓度为1.85g/L时,停止发酵。

[0056]发酵结束后,取样进行HPLC测定,发酵液中L-丙氨酸含量为110g/L,残葡萄糖浓度为1.85g/L,发酵转化率90%。

[0057]实施例2
[0058]本实施例涉及一种L-丙氨酸的制备方法,具体包括如下步骤:
[0059]1、按照与实施例1相同的方法制备种子液,得OD值为3.75的种子液。

[0060]2、将所述种子液按体积分数7%接种到上述葡萄糖培养基中,在温度为为30℃;空气流量为2m3/h的条件下发酵培养,培养过程中,通过流加空气保持罐压0.04-0.06MPa;采用液氨控制pH为6.50。

[0061]3、当发酵液残葡萄糖浓度为40.6g/L,一次性补加60%葡萄糖溶液,至发酵液中的葡萄糖的总浓度为159.2g/L,继续至发酵液中的葡萄糖浓度为1.77g/L时,停止发酵。

[0062]发酵结束后,取样进行HPLC测定,发酵液中L-丙氨酸含量为115g/L,残葡萄糖浓度为改为1.77g/L,发酵转化率90.5%。

[0063]实施例3
[0064]本实施例涉及一种L-丙氨酸的制备方法,具体包括如下步骤:
[0065]1、按照与实施例1相同的方法制备种子液,得OD值为3.86的种子液。

[0066]2、将所述种子液按体积分数7%接种到上述葡萄糖培养基中,在温度为为30℃;空气流量为2m3/h的条件下发酵培养,培养过程中,通过流加空气保持罐压0.04-0.06MPa;采用液氨控制pH为6.50。

[0067]3、当发酵液残葡萄糖浓度为33.5g/L,一次性补加70%葡萄糖溶液,至发酵液中的葡萄糖的总浓度为166.5g/L,继续至发酵液中的葡萄糖浓度为1.80g/L时,停止发酵。

[0068]发酵结束后,取样进行HPLC测定,发酵液中L-丙氨酸含量为123g/L是残葡萄糖浓度为1.80g/L,发酵转化率91%。

[0069]实施例4
[0070]本实施例涉及一种L-丙氨酸的制备方法,具体包括如下步骤:
[0071]1、按照与实施例1相同的方法制备种子液,得OD值为3.9的种子液。

[0072]2、将所述种子液按体积分数7%接种到上述葡萄糖培养基中,在温度为30℃;空气流量为2m3/h的条件下发酵培养,培养过程中,通过流加空气保持罐压0.04-0.06MPa;采用液氨控制pH为6.50。

[0073]3、当发酵液残葡萄糖浓度为31.0g/L,一次性补加75%葡萄糖溶液,至发酵液中的葡萄糖的总浓度为127.2g/L,继续至发酵液中的葡萄糖浓度为1.62g/L时,停止发酵。

[0074]发酵结束后,取样进行HPLC测定,发酵液中L-丙氨酸含量为113g/L,残葡萄糖浓度为1.62g/L,发酵转化率90.2%。

[0075]实施例5
[0076]本实施例涉及一种L-丙氨酸的制备方法,具体包括如下步骤:
[0077]1、按照与实施例1相同的方法,通过两级种子制备种子液,得OD值为6.85的种子说 明 书4/5页8CN 107022583 B8 液。

[0078]2、将所述种子液按体积分数7%接种到上述葡萄糖培养基中,在温度为为30℃;空气流量为2m3/h的条件下发酵培养,培养过程中,通过流加空气保持罐压0.04-0.06MPa;采用液氨控制pH为6.50。

[0079]3、当发酵液残葡萄糖浓度为31.0g/L,一次性补加75%葡萄糖至发酵液中的葡萄糖的总的添加浓度为152.54g/L,继续至发酵液中的葡萄糖浓度为1.70g/L时,停止发酵。

[0080]发酵结束后,取样进行HPLC测定,发酵液中L-丙氨酸含量为125g/L,残葡萄糖浓度为1.70g/L,发酵转化率90.2%。

[0081]对比例1
[0082]与实施例3相比,本实施例的区别在于,省略步骤3,即不额外添加葡萄糖,仅靠最初的培养基培养至发酵结束。

[0083]发酵结束后,取样进行HPLC测定,发酵液中L-丙氨酸含量为82g/L,残葡萄糖浓度为1.86g/L,发酵转化率90%。

[0084]对比例2
[0085]与实施例3相比,本实施例的区别在于,步骤3中,当发酵液中葡萄糖的浓度为60g/L时,补加葡萄糖。

[0086]发酵结束后,取样进行HPLC测定,发酵液中L-丙氨酸含量为115g/L,残葡萄糖浓度为2.86g/L,发酵转化率85%。
可见,在残留葡萄糖的浓度过高时添加葡萄糖,会明显降低发发酵的转化率,不利于培养基中葡萄糖的转化利用,而且由于渗透压过高,在葡萄糖浓度为2.86微生物就停止即停止发酵。

[0087]对比例3
[0088]与实施例3相比,本实施例的区别在于,步骤3中,补加浓度为80%的葡萄糖至发酵液中的浓度为166.5g/L。

[0089]发酵结束后,取样进行HPLC测定,发酵液中L-丙氨酸含量为120g/L,残葡萄糖浓度为1.89g/L%,发酵转化率88%%。

[0090]对比例4
[0091]与实施例3相比,本实施例的区别在于,步骤3中,补加葡萄糖后,发酵液中的葡萄糖的浓度为140g/L。

[0092]发酵结束后,取样进行HPLC测定,发酵液中L-丙氨酸含量为110g/L,残葡萄糖浓度为1.58g,发酵转化率90.1%。

[0093]虽然,上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验,对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之作一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。
因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。
说 明 书5/5页9CN 107022583 B9
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