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一种纳米脂质微泡的制备方法及应用

作者:专利检索网
来源:https://www.cange.org.cn/famingzhuanli
日期:2020-11-06 15:15






申请号 201710115461.7
申请日 2017.02.28
同一申请的已公布的文献号 CN 106798729 A
2017.06.06
专利权人 居颂光地址 215000 江苏省苏州市沧浪区里河新村29-1幢102室
发明人 居颂光 居颂文 
专利代理机构 苏州华博知识产权代理有限公司 32232代理人 何蔚
Int.Cl.A61K 9/127
(2006.01)A61K 36/87
(2006.01)A61K 47/46
(2006.01)A61P 1/00
(2006.01)A61P 1/16
(2006.01)A23L 33/105
(2016.01)
对比文件CN 103479682 A,2014.01.01,CN 103479682 A,2014.01.01,CN 103479682 A,2014.01.01,CN 101721718 A,2010.06.09,阮征 等.葡萄汁调控断奶大鼠小肠抗氧化能力与形态发育的影响.《食品工业科技》.2012,第31卷
(第21期),第340-344页.阮征 等.葡萄汁调控断奶大鼠小肠抗氧化能力与形态发育的影响.《食品工业科技》.2012,第31卷
(第21期),第340-344页.任俊庭 等.葡萄酒及葡萄汁对小鼠急性酒精性肝损伤的作用.《热带医学杂志》.2015,第15卷
(第12期),第1610-1613页.任俊庭 等.葡萄酒及葡萄汁对小鼠急性酒精性肝损伤的作用.《热带医学杂志》.2015,第15卷
(第12期),第1610-1613页.审查员 李林
发明名称一种纳米脂质微泡的制备方法及应用
摘要本发明提供一种纳米脂质微泡的制备方法,包括葡萄汁液的提取、过滤、浓缩液的提取、纳米脂质微泡的纯化、纳米脂质微泡的保存。
本发明制备的纳米脂质微泡具有结构稳定的优点,并具有特殊的功能,单独或配伍或作为添加成分用于保护肠道及肝脏药品及保健品的制造。
本发明制备方法采用过滤方法,不使用价格高昂的离心设备,成本大大降低,制备步骤简单,产出量大幅增加,便于实现工业化生产,同时使纳米脂质微泡能够真正投入应用。
权利要求书1页 说明书4页 附图3页CN 106798729 B2020.06.19CN 106798729 B 1.一种纳米脂质微泡的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括以下步骤:
(1)葡萄汁液的提取:将葡萄原料洗净榨出汁液;
(2)过滤:将
(1)所得汁液过滤除去残渣,收集滤过的液体;
(3)浓缩液的提取:将
(2)所得滤过液通过微滤和超滤提取富集纳米脂质微泡的浓缩液;
(4)纳米脂质微泡的纯化:将
(3)所得富集纳米脂质微泡的浓缩液稀释,然后通过超滤去除杂质,获得纳米脂质微泡浓缩液;
(5)纳米脂质微泡的保存:将
(4)所得的纳米脂质微泡浓缩液冻干处理或直接冻存,获得纳米脂质微泡成品;所述纳米脂质微泡具有脂膜结构,直径1~100nm;所述步骤
(2)具体为:将
(1)所得的汁液用5~12500目过滤材料过滤除去残渣,收集滤过的液体;所述步骤
(3)具体为:将
(2)所得滤过液经超声处理,然后采用0.1~0.5μm微滤膜过滤,收集微滤过的液体;再将微滤过的液体采用0.001~0.05μm超滤膜超滤,弃滤过液,收集富含纳米脂质微泡的浓缩液。
2.如权利要求1所述的纳米脂质微泡,其特征在于,所述葡萄原料为红葡萄、紫葡萄、黑葡萄中的至少一种。
3.如权利要求1所述的纳米脂质微泡的制备方法,其特征在于,所述葡萄汁液的提取、过滤及浓缩液的提取都在0~37摄氏度环境中进行。
4.一种如权利要求1~3任一所述的纳米脂质微泡在保护肠道及肝脏药品及保健品的制备中的应用。
权 利 要 求 书1/1页2CN 106798729 B2 一种纳米脂质微泡的制备方法及应用技术领域
[0001]本发明属于医药领域,具体涉及一种纳米脂质微泡的制备方法及应用。
背景技术
[0002]保护肠道及肝脏等药物的制备主要有化学合成物为原料制备以及中草药方剂等。
采用植物纳米脂质微泡为原料制备这些用途的药物目前尚未见报道。
脂质微泡
(1iposome)是一种人工膜,是由脂质双分子层形成的微型囊泡体,直径25~1000nm不等。
传统方法制备的脂质微泡不具有生物学功能,而仅作为药物载体及转基因载体,要使其具备特殊的生物学功能尚需包被其它药物或生物活性物质。

[0003]此外,现在制备具有活性功能的囊泡体
(与脂质微泡结构类似)大多采用离心的方法从动物细胞培养上清或体液中制备,仪器价格高昂,制备速度缓慢,产量低,难以实现工业化生产,使纳米微泡难以真正形成应用。
发明内容
[0004]本发明的目的是提供一种纳米脂质微泡的制备方法,不采用价格高昂的离心设备,制备容易,步骤简单,成本大大降低,便于实现工业化生产。
制备出的纳米脂质微泡具有结构稳定、纯天然无毒副作用、易吸收、活性高,可单独或配伍或作为添加成分用于保护肝脏、肠道药物及保健品中。

[0005]为实现上述目的,本发明的技术方案是:一种纳米脂质微泡的制备方法,所述制备方法包括以下步骤:
[0006]
葡萄汁液的提取:将葡萄原料洗净榨出汁液;
[0007]
过滤:将
所得汁液过滤除去残渣,收集滤过的液体;
[0008]
浓缩液的提取:将
所得滤过液通过微滤和超滤提取富集纳米脂质微泡的浓缩液;
[0009]
纳米脂质微泡的纯化:将
所得富集纳米脂质微泡的浓缩液稀释,然后通过超滤获得去除杂质的纳米脂质微泡浓缩液;
[0010]

所得的纳米脂质微泡浓缩液冻干处理获得纳米脂质微泡成品。

[0011]其中,所述纳米脂质微泡具有脂膜结构。

[0012]其中,所述葡萄原料为红葡萄、紫葡萄、黑葡萄中的至少一种。

[0013]其中,所述步骤
具体为:将
所得的汁液用5~12500目过滤材料过滤除去残渣,收集滤过的液体。

[0014]其中,所述步骤
具体为:将
所得滤过液采用0.1~0.5μm微滤膜过滤,收集微滤过的液体;再将微滤过的液体采用0.001~0.05μm超滤膜超滤,弃滤过液,收集富含纳米脂质微泡的浓缩液。

[0015]其中,所述葡萄汁液的提取、过滤及浓缩液的提取都在0~37摄氏度环境中进行。

[0016]本发明还提供一种纳米脂质微泡的应用,所述纳米脂质微泡单独或配伍或作为添说 明 书1/4页3CN 106798729 B3 加成分应用于保护肠道及肝脏药品及保健品中。

[0017]本发明所述过滤可采用至少一种网孔直径的过滤材料,按照网孔直径由大到小依次过滤。

[0018]本发明中,纳米脂质微泡、葡萄来源纳米脂质微泡、葡萄纳米脂质微泡、葡萄来源活性成分纳米级脂质微泡,均指本发明制备的纳米脂质微泡。

[0019]本发明采用葡萄制备制造的脂质微泡,不仅具备了强大的生物学功能,而且因药物在纳米尺寸
(1-100nm)时可提高其生物利用度及减轻毒副作用等优势,本发明的纳米脂质微泡的吸收效率更高。

[0020]为了鉴定本发明葡萄来源的纳米脂质微泡,本发明对样品进行了透射电子显微镜观察,结果显示,样品为100纳米以下的微泡结构。
为了鉴定本发明葡萄来源纳米脂质微泡的生物学功能,本发明进行了纳米脂质微泡保护急性小鼠酒精肝的体内实验和纳米脂质微泡保护DSS诱导的急性肠炎小鼠的体内实验。
结果显示采用本发明方法制备的葡萄纳米脂质微泡能显著降低急性酒精肝模型小鼠的谷草转氨酶
(AST),谷丙转氨酶
(ALT)及AST/ALT比值,以及能够抑制肝脏的损伤,保护肝脏。
本发明纳米脂质微泡还能促进大肠和小肠肠道组织的修复,延长小鼠的生存时间。

[0021]本发明采用葡萄为原料,制备的植物纳米脂质微泡为直径1~100nm的膜结构微泡,具有结构稳定、纯天然无毒副作用、易吸收、活性高的优点,具有保护肝脏和肠道的强大功能,可单独或配伍或作为添加成分用于保护肝脏和肠道药物及保健品中。

[0022]本发明制备方法采用过滤方法,不使用价格高昂的离心设备,成本大大降低,制备步骤简单,产出量则大幅增加,产出量以kg计,大大超出了以往采用离心设备从动物细胞培养上清及体液制备纳米微泡只能产出几克的限制,便于实现工业化生产,同时使纳米脂质微泡能够真正投入应用。
附图说明
[0023]图1是本发明葡萄来源纳米脂质微泡的粒子结构图。

[0024]图2是葡萄来源纳米脂质微泡保护小鼠肝脏肝功能指标评价结果。

[0025]图3是葡萄来源纳米脂质微泡保护小鼠肝脏病理评价结果。

[0026]图4是实施例1制备的葡萄来源纳米脂质微泡用于治疗肠道损伤模型的效果评价结果。

[0027]图5是实施例1制备的葡萄来源纳米脂质微泡用于治疗肠道损伤模型的效果评价结果。

[0028]图6是实施例1制备的葡萄来源纳米脂质微泡用于治疗肠道损伤模型的效果评价结果。

[0029]图7是实施例1制备的葡萄来源纳米脂质微泡用于治疗肠道损伤模型的效果评价结果。
具体实施方式
[0030]下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步的描述,但本发明并不限于这些实施例。
说 明 书2/4页4CN 106798729 B4
[0031]以下借助非限制性实施例详细描述本发明。
本领域技术人员可以在不背离本发明的基本精神和原则前提下,改变或改动本说明书中描述的某些技术内容或技术环节。
但人们可以理解到,这些平行的改变或改动均将包括在本发明的权利要求范围之内。

[0032]实施例1
[0033]葡萄来源活性成分纳米级脂质微泡的制备。

[0034]
清水洗净的红葡萄在0~37摄氏度环境中通过采用挤压式压榨机榨出汁液;
[0035]
榨出的汁液经5~12000目滤网过滤
(在0~37摄氏度环境中操作),收集滤过的液体;
[0036]
浓缩液的提取:将滤过的液体经超声处理,然后采用0.1~0.5μm
(微米)微滤膜过滤,收集微滤过的液体;再将微滤过的液体采用0.001~0.05μm超滤膜超滤,弃滤过液,收集富含纳米脂质微泡的浓缩液;
[0037]
纳米脂质微泡的纯化:富集脂质微泡的浓缩液体采用磷酸缓冲液PBS或生理盐水稀释,然后通过超滤获得去除杂质的纳米脂质微泡浓缩液;
[0038]
纳米脂质微泡的保存:纳米脂质微泡浓缩液冻干处理或直接冻存。

[0039]采用电子显微镜观察纳米脂质微泡粒子的结构,以鉴定本发明制备的纳米脂质微泡的结构及生物学功能,结果显示采用本发明方法制备的纳米粒子具有膜结构的纳米级微泡
(1-100nm),如图1所示,样品颗粒呈1-100nm的泡状结构。

[0040]以本发明方法制备纳米脂质微泡,产出量以kg计,大大超出了以往离心制备纳米微泡只能产出几克的限制,使纳米脂质微泡真正实现工业化生产,同时能够真正投入应用。

[0041]实施例2
[0042]将实施例1制备的葡萄来源纳米脂质微泡用于保护肝脏效果的评价:小鼠灌胃50%酒精构建急性小鼠酒精肝模型,每天灌胃方式给药。
7天后小鼠摘眼球取血并检测肝功能生化指标,处死小鼠,取小鼠肝脏病理切片观察小鼠的肝脏损伤。

[0043]小鼠体内实验证明,小鼠饲喂酒精后肝脏损伤,谷草转氨酶
(AST)、谷丙转氨酶
(ALT)显著升高,AST/ALT比值也显著升高,而给药的小鼠AST,ALT及AST/ALT比值明显下降
(图2)。
如图2,饲喂葡萄来源纳米脂质微泡后酒精肝模型小鼠的肝功能指标,谷草转氨酶
(AST)、谷丙转氨酶
(ALT),AST/ALT比值明显下降,说明本发明药物能有效改善肝功能,有效保护肝脏。

[0044]图3是葡萄来源纳米脂质微泡保护小鼠肝脏病理评价结果,病理结果显示小鼠饲喂酒精后干细胞变大轮廓模糊,而饲喂葡萄来源纳米脂质微泡后肝细胞损伤减轻。
这为临床治疗肝脏疾病提供了新途径。

[0045]实施例3
[0046]将实施例1制备的葡萄来源活性成分纳米膜性囊泡用于治疗肠道损伤模型的效果评价:
小鼠饮水中加入3%硫酸葡聚糖钠
(DSS),构建小鼠急性肠炎模型;
每天灌胃方式给药;
一部份小鼠7天处死,取出大肠和小肠,测量大肠的长度,病理切片观察肠道大肠和小肠的损伤;
另一部分小鼠观察生存时间。

[0047]本发明的葡萄来源纳米脂质微泡能够明显减轻DSS诱导的急性溃疡性结肠炎
(UC)模型小鼠中肠道损伤。
C57BL/6小鼠自由饮用3%DSS溶液建立急性UC模型,实验组
(C组)每天灌胃方式给药,每只每天补给200μg葡萄纳米脂质微泡,对照组
(B组)灌胃相同体积的溶说 明 书3/4页5CN 106798729 B5 剂
(PBS),观察小鼠的生存时间。
图4是纳米脂质微泡用于治疗肠道损伤模型的效果评价结果。
结果显示,饲喂葡萄来源纳米脂质微泡后肠炎小鼠生存时间显著延长。

[0048]7天后处死小鼠,取出大肠和小肠,测量大肠的长度,冰冻切片HE染色观察组织的损伤。
对照组小鼠大肠变短
(B),实验组给药后小鼠大肠变短减轻
(C),A组为正常小鼠未给予DSS,仅灌胃溶剂
(PBS)。
图5是葡萄来源纳米脂质微泡用于治疗肠道损伤模型的效果评价结果。
可见饲喂葡萄来源纳米脂质微泡后肠炎小鼠大肠长度变短程度减轻。

[0049]图6是葡萄来源纳米脂质微泡用于治疗肠道损伤模型的病理切片结果。
对照组小鼠大肠肠道黏膜损伤严重,肠道隐窝结构破坏
(B),实验组给药后小鼠肠黏膜损伤减轻,仍具备完整的隐窝结构
(C),A组为正常小鼠未给予DSS,仅灌胃溶剂
(PBS)。
病理组织切片结合HE染色评价结果显示,饲喂葡萄来源纳米脂质微泡后肠炎小鼠大肠结构明显损伤减轻。

[0050]图7是葡萄来源纳米脂质微泡用于治疗肠道损伤模型的病理切片结果。
对照组小鼠小肠肠道黏膜损伤严重,肠粘膜变薄,肠道隐窝结构破坏
(B),实验组给药后小鼠肠黏膜损伤减轻,仍具备完整的隐窝结构
(C),A组为正常小鼠未给予DSS,仅灌胃溶剂
(PBS)。
病理组织切片结合HE染色评价结果显示,饲喂葡萄来源纳米脂质微泡后肠炎小鼠小肠结构明显损伤减轻。

[0051]本发明不仅能够有效改善肝功能,保护肝脏,还能促进肠炎模型小鼠肠道损伤的修复,延长小鼠的生存时间,这为临床治疗肝脏和肠道疾病提供了新途径。

[0052]用本发明方法制备葡萄纳米脂质微泡的优点是:
[0053]
制备的葡萄纳米脂质微泡结构稳定。
采用本发明方法制备的纳米脂质微泡具有脂膜结构,结构稳定。

[0054]
本发明纳米脂质微泡能保护肝脏及保护肠道,可作为肝脏和肠道疾病的有效治疗药物或保健品。

[0055]
本发明制备方法采用过滤方法,不使用价格高昂的离心设备,成本大大降低,制备步骤简单,产出量大幅增加,便于实现工业化生产,同时使纳米脂质微泡能够真正投入应用。

[0056]以上所述的仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明创造构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。
说 明 书4/4页6CN 106798729 B6 图1图2图3说 明 书 附 图1/3页7CN 106798729 B7 图4图5图6说 明 书 附 图2/3页8CN 106798729 B8 图7说 明 书 附 图3/3页9CN 106798729 B9
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